RPR

El antígeno RPR-carbon es un preparado no treponémico
especialmente diseñado para la detección y semi-cuantificación
por coaglutinación macroscópica en porta o microplaca de
reaginas plasmáticas, un grupo de anticuerpos dirigidos contra
componentes tisulares producidos por los pacientes infectados por T. pallidum.

La determinación rápida de las reaginas plasmáticas se efectúa
ensayando el antígeno –una asociación de lípidos complejos y
carbón- frente a las muestras problema. La presencia o ausencia
de una aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia
de reaginas luéticas en las muestras ensayadas1-4 .

COMPOSICION DE LOS REACTIVOS
Antígeno RPR-carbon. Suspensión estabilizada conteniendo
cardiolipina 0,003%, lecitina 0,020-0,022%, colesterol 0,09%,
cloruro de colina 10%, EDTA 0,0125 mol/L, micropartículas de
carbón 0,01%, en tampón fosfato. Contiene 0,1% de
mertiolato sódico.

CONTROL +
Suero de conejo inmune. Contiene 0,95 g/L de acida sódica.

CONTROL -
Suero animal. Contiene 0,95 g/L de acida sódica

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Conservar a 2-8ºC. No congelar los componentes del kit ya
que podría verse afectada la funcionalidad del test.
El Antígeno y los Controles son estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta

PREPARACION DE LOS REACTIVOS
Resuspender el Antígeno con suavidad para asegurar su
homogeneidad, acoplar la aguja dosificadora al vial dispensador y
aspirar la cantidad de antígeno que se considere necesaria.
Los Controles están listos para su uso.

MUESTRAS
Suero o plasma claro, reciente, sin inactivar.
Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8ºC durante 48
horas antes del ensayo, o hasta meses a –20ºC. Los plasmas se
ensayarán dentro de las 48 siguientes a su obtención

EQUIPO ADICIONAL
Pipetas de volumen variable. Solución salina (NaCl 0,9%, para técnica semi-cuantitativa).
Agitador mecánico rotatorio de velocidad regulable a 100 r.p.m.
que circunscriba un círculo de unos 2 cm de diámetro en el
plano horizontal. Cronómetro.

Prueba cualitativa
1.Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente (Mediante una pipeta automática depositar 50 ìL de cada muestra en un círculo distinto de la tarjeta visualizadora.)
2.Emplear una punta nueva para cada muestra y desecharla tras
su empleo.
3.En dos círculos adicionales, depositar 1 gota de
cada uno de los sueros control.
4.Agitar el vial dispensador del antígeno y manteniéndolo en
posición vertical, presionar ligeramente hasta asegurarse que
la aguja esta libre de aire y que la gota obtenida es correcta.
5.Con el vial dispensador invertido, situar la aguja en posición
vertical perpendicular a la tarjeta visualizadora
6.Oprimir suavemente el vial dispensador, dosificando 1 gota de
antígeno en cada círculo, próximo a la muestra que debe
ensayarse
7.Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable,
extendiéndola de forma que cubra por completo la superficie
interior de cada anillo.
8.Emplear palillos distintos para cada mezcla.
9.Depositar la tarjeta en el agitador rotatorio horizontal,
previamente ajustado a 100 r.p.m., durante 8 minutos.
10.Observar con la ayuda de una lámpara de alta intensidad o
frente a luz diurna fuerte, la aparición de cualquier signo de
aglutinación dentro del minuto siguiente a la retirada de la
tarjeta del agitador.

Lectura
Reacción negativa: Las partículas de carbón permanecen en
suspensión homogénea, sin presencia visible de agregados, tal
como se presenta en el control negativo.
Reacción positiva: Un resultado positivo se manifiesta por una
agregación de las partículas de carbón, que puede variar entre
una ligera pero claramente definida agregación y una marcada
e intensa.

Prueba cuantitativa
Para cada muestra a analizar se utilizan 5 círculos de una
tarjeta pipeteando 50 ìL de solución salina (0,9%) en cada uno
de ellos.

1.Pipetear sobre el diluyente del primer círculo 50 ìL de muestra,
y empleando la misma punta, mezclar mediante aspiraciones y
expulsiones repetidas, transfiriendo 50 ìL de la mezcla
resultante sobre el diluyente del segundo círculo.
2.Continuar con la serie de dobles diluciones hasta el quinto
círculo, desechando los 50 ìL provenientes del mismo. Las
diluciones finales obtenidas serán: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32.
3.Ensayar cada una de las diluciones
4. El título de la muestra corresponde a la máxima dilución que presenta reactividad.
La dilución siguiente debe ser negativa.
5.En caso de resultar reactiva la dilución más alta ensayada, repetir el ensayo
comenzando con una dilución preliminar al 1:16.
6.Comodiluyente de esta nueva serie de dobles diluciones se empleará
Control negativo diluido al 1:50 con solución salina, en vez de
la solución salina empleada anteriormente.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Tanto en las infecciones tempranas como en los últimos estadios
de la enfermedad pueden darse reacciones negativas falsas. Se han descrito con antígenos cardiolipínicos falsas
positividades en enfermedades tales como la mononucleosis
infecciosa, lupus eritematoso y neumonía viral. El embarazo, la
adicción a narcóticos y las enfermedades autoinmunes pueden
asimismo dar reacciones positivas falsas.
No utilizar con líquido cefalorraquídeo.